色谱

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第31卷第8期目次

2013, 31 (8): 0-0.

摘要 ( 570 )

PDF(889KB) ( 36 )

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定量蛋白质组学分析方法

钱小红

2013, 31 (8): 719-723. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.07022

摘要 ( 655 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(900KB) ( 522 )

精确测量多个不同生理或病理条件下生物样本中蛋白质表达量的变化是定量蛋白质组学(quantitative proteomics)研究的重要内容。与传统的蛋白质定量方法(见表1)相比,组学规模的蛋白质定量可以实现在一次实验中对成百上千个蛋白质的定量测定和比较分析,为规模化发现和验证疾病诊断的生物标志物以及发展新的药物靶标提供了重要手段。

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超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中的利巴韦林和金刚烷胺

云环, 崔凤云, 严华, 刘鑫, 何悦, 张朝晖

2013, 31 (8): 724-728. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01023

摘要 ( 1753 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(831KB) ( 296 )

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定鸡肉中利巴韦林和金刚烷胺的分析方法。样品用1%(体积分数)三氯乙酸溶液-乙腈(1:1, v/v)溶液提取,经Supelco LC-SCX固相萃取柱净化后用Acquity UPLC BEH Hillic柱(150 mm×2.1 mm, 1.7 μm)分离,以甲醇和0.1%(体积分数)甲酸作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式进行检测。结果表明,利巴韦林和金刚烷胺在10.0~100.0 μg/L范围内线性关系良好(r²≥0.99)。方法的定量限(信噪比为10)为4.0 μg/kg,在4.0、8.0、20.0 μg/kg添加水平的回收率为78%~102.5%,相对标准偏差(n=6)在2.2%~7.6%之间。该方法快速、灵敏、准确,适合于鸡肉中利巴韦林和金刚烷胺的同时、快速、高灵敏度的分析检测。

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液相色谱/线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法快速筛查葡萄酒中的合成色素

黎永乐, 郑彦婕, 熊岑, 曾泳艇, 陈素娟

2013, 31 (8): 729-733. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01019

摘要 ( 1318 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(855KB) ( 365 )

基于液相色谱/线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱(LC/LTQ-orbitrap MS)技术构建了合成色素的质谱数据库,利用精确质量数和该数据库中二级质谱图的匹配度分析筛查,建立了葡萄酒中15种水溶性合成色素的快速筛查方法。葡萄酒样品通过弱阴离子交换柱进行净化后经苯基色谱柱分离,然后用LTQ-orbitrap MS对样品中的色素进行筛查和定量检测。结果显示,葡萄酒中15种色素的检出限在0.00040~0.18 mg/L之间,3个加标水平的回收率在43.1%~127%之间,平均相对标准偏差均小于10%。加标样品的二级质谱图与数据库中标准样品二级质谱图的匹配度均达到98%以上。该方法可在无标准物质的情况下对葡萄酒中的15种合成色素进行筛查检测。

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杂环衍生化-气相色谱-三重四极杆质谱法检测人血液中的二十二碳六烯酸

王静, 王丹, 张华, 彭孝军, 董珺璞

2013, 31 (8): 734-738. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01050

摘要 ( 1205 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(841KB) ( 287 )

建立了人血液中二十二碳六烯酸(DHA)的杂环衍生化-气相色谱-三重四极杆质谱(GC-MS/MS)检测方法。以2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)作为DHA的杂环衍生化试剂,优化了杂化反应的最佳反应条件,并使用GC-MS/MS在多反应监测模式下,以内标法对DHA进行定量检测。在0.07~10 μg/mL范围内,线性关系良好(r²=0.9991);检出限(S/N=2.8)为0.02 μg/mL;定量限(S/N=10)为0.07 μg/mL。在高、中、低3个不同添加水平下,其平均回收率在94.40%~103.13%之间,相对标准偏差(RSD)在1.51%~3.16%之间。该方法操作简便,所需样品量少,结果准确可靠,适用于人血液中DHA的分析检测。

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凝胶渗透色谱-固相萃取联合净化气相色谱-质谱联用法测定动物性食品中30种有机氯农药的残留量

杜娟, 吕冰, 朱盼, 苗虹, 吴永宁

2013, 31 (8): 739-746. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01036

摘要 ( 1343 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(905KB) ( 290 )

建立了猪肉、鸡肉、鱼肉和虾肉等动物性食品中30种有机氯农药残留的气相色谱-质谱联用检测方法。样品匀浆后,采用乙腈提取,以凝胶渗透色谱和弗罗里硅土固相萃取柱联合进行净化,气相色谱-质谱检测,以同位素内标法定量。30种有机氯农药的响应在5.0~500.0 μg/L范围内呈良好的线性,相关系数在0.996以上,各有机氯农药的检出限在0.2~2.7 μg/kg之间。以猪肉、鸡肉、鱼肉和虾肉作为代表性基质,进行5.0、10.0、20.0 μg/kg 3个水平的加标回收试验,回收率在55.0%~119.1%之间,相对标准偏差在0.4%~15.0%之间。该方法准确可靠,灵敏度高,样品净化效果好,能够满足动物性食品中有机氯农药多残留痕量分析的要求。

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多重吸附同步净化-气相色谱-质谱法测定干性样品中丁烯氟虫腈的残留量

丁立平, 郭菁, 郑铃, 陈春添, 陈志涛

2013, 31 (8): 747-752. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01033

摘要 ( 1122 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(863KB) ( 216 )

建立了干性样品中丁烯氟虫腈残留量的多重吸附同步净化(MASP)-气相色谱-质谱检测方法。前处理以1%乙酸-乙腈提取样品,应用MASP法对样品同时进行提取、盐析和净化,并利用气相色谱-质谱仪在选择离子扫描(SIM)模式下进行检测,以基质匹配标准溶液外标法定量。结果表明:丁烯氟虫腈在2~100 μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r²)不小于0.999;在2~10 μg/kg添加水平范围内,丁烯氟虫腈的平均回收率为92.2%~97.5%,相对标准偏差(RSD, n=6)为2.69%~5.21%;方法检出限(S/N=3)为2 μg/kg;定量限(S/N=10)为6 μg/kg。本方法操作简便、快速、准确,可用于干性样品中丁烯氟虫腈的日常检测。同时,对丁烯氟虫腈的裂解机理进行了探讨。

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梯度液相色谱保留时间公式在梯形梯度洗脱研究中的应用

孙小丽, 郝卫强, 王俊德, 狄斌, 陈强, 庄韦, 俞强, 张培培

2013, 31 (8): 753-757. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01018

摘要 ( 1428 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(824KB) ( 238 )

根据前期得到的梯度液相色谱保留时间计算公式,在不指定溶剂强度模型形式的前提下,探讨了梯形梯度洗脱的一些特点。对于溶质在梯形梯度坡度上流出时的情形,推导得到溶质流出色谱柱所对应的流动相组成(φ_R)随梯度斜率(B)变化的表达式。该公式表明,在该情形中φ_R将会随着B值的增加而增加。对于溶质在梯形梯度最后一个等度区间流出时的情形,如果初始和终止流动相组成保持不变而仅有梯度的斜率发生变化时,从理论上证明了溶质保留时间(t_R)与梯度斜率的倒数(1/B)之间呈线性关系。实验中以C18色谱柱为固定相,甲醇-水为流动相,联苯为样品,测定了不同流动相组成以及梯形梯度条件下的保留时间,所得到的实验值与理论值吻合,从而验证了理论方法的正确性。

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反相高效液相色谱法分离2-(氟苯基)-5-甲基苯并恶唑和2-(氯苯基)-5-甲基苯并恶唑的位置异构体

王敏

2013, 31 (8): 758-762. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01030

摘要 ( 1047 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(844KB) ( 224 )

基于商品化的普通色谱柱建立了2-(氟苯基)-5-甲基苯并恶唑和2-(氯苯基)-5-甲基苯并恶唑邻、间、对位置异构体的分离检测方法。色谱柱为Inertsil ODS-SP C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5 μm),以乙腈(A)和水(B)为流动相,在60%A~80%A间线性梯度洗脱15 min,流速为1.5 mL/min,柱温40℃,检测波长为310 nm。在质量浓度为2~200 mg/L范围内,2-(氟苯基)-5-甲基苯并恶唑邻、间、对位的异构体、2-(氯苯基)-5-甲基苯并恶唑邻、间、对位的异构体具有良好的线性关系,6种化合物的检出限(S/N=3)依次为0.0307、0.0293、0.0315、0.0226、0.0237、0.0226 mg/L。该法既为5-甲基苯并恶唑与氟苯或氯苯碳氢活化偶联反应制备的异构体混合物提供了一个快速检测的方法,又为2-芳基苯并恶唑类异构体的分离检测提供了参考。

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亲水模式下流动相pH值对磷酸化肽在Click OEG-CD材料上富集选择性的影响

赵艳艳, 郭志谋, 李秀玲, 梁鑫淼

2013, 31 (8): 763-768. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.03003

摘要 ( 890 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(1594KB) ( 170 )

以标准蛋白质α-酪蛋白的酶解液作为研究对象,考察流动相pH值对磷酸化肽在Click OEG-CD材料上富集选择性的影响。首先以磷酸苯二钠作为模型化合物考察流动相pH值对其在Click OEG-CD材料上的保留影响,结果表明当pH值低于磷酸根的pK_a值时,磷酸苯二钠难以电离,与材料的离子交换作用较弱,因而保留也较弱。然后在亲水模式下流动相pH值分别为2, 4, 6时考察Click OEG-CD材料对α-酪蛋白的酶解液中磷酸化肽的富集选择性影响。结果表明,当流动相pH为2时,磷酸化肽不能被材料富集;当pH为4时,磷酸化肽能够被富集,而且洗脱窗口较窄;当pH为6时,磷酸化肽也能够被富集,但是洗脱窗口较宽。因此适合亲水模式下富集磷酸化肽的流动相pH值为4。本研究结果能够为今后将Click OEG-CD材料更好的应用于磷酸化肽富集提供有意义的借鉴。

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二氧化锆微球表面键合磺化交联聚苯乙烯固相萃取填料的制备及应用

申书昌, 柳玉辉, 肖晓杏

2013, 31 (8): 769-774. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.04015

摘要 ( 1157 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(3370KB) ( 297 )

以聚合诱导胶体凝聚法(PICA)制备二氧化锆微球,用钛酸酯偶联剂对其进行表面改性,使其接枝上碳碳双键基团。在溶液体系中,该双键与单体苯乙烯和二乙烯苯在自由基引发下交联聚合,形成的聚合物包覆在二氧化锆微球表面。再通过磺化方法将磺酸基离子连接到苯环上,得到阳离子交换固相萃取填料。通过红外光谱、扫描电镜/X射线能谱等手段对其进行了表征。将装填得到的固相萃取柱与高效液相色谱联用,测定了水中的甲基磺草酮、阿特拉津和乙草胺。3种化合物的色谱峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,相关系数(r²)均大于0.99;甲基磺草酮、阿特拉津和乙草胺的检出限分别为5.41、6.72和13.4 μg/L。结果表明,制得的聚合物包覆二氧化锆微球的粒径为6~8 μm,用该填料制成的固相萃取小柱对3种目标物的吸附率高。

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高效液相色谱法测定化妆品中17种紫外线吸收剂

毛希琴, 边海涛, 曲宝成

2013, 31 (8): 775-780. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.02011

摘要 ( 1194 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(850KB) ( 279 )

为避免使用四氢呋喃和高氯酸这样高腐蚀性的溶剂作流动相,本文从样品前处理方法、色谱柱的选择和流动相条件的优化等方面对《化妆品卫生规范》规定的15种紫外线吸收剂的高效液相色谱测定方法进行了改进,并将目标物检测范围扩大为17种。样品用四氢呋喃/甲醇/水体系提取,离心过滤后,以Phenomenex PFP柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)为分离色谱柱,以20%异丙醇的甲醇溶液(含0.1%甲酸)和水溶液(含0.1%甲酸)作为流动相,梯度洗脱,以311 nm和280 nm为检测波长,进行定性和定量分析。回收率试验及实际阳性样品测定均表明将本方法用于化妆品中17种紫外线吸收剂的测定,结果准确、可靠。与《化妆品卫生规范》方法相比,普通液相色谱仪无需改进即可实现17种紫外线吸收剂的同时检测,增加了方法的普适性,同时所有目标化合物全部基线分离,分离度的提高增加了定量的准确性。

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超高效液相色谱-串联四极杆质谱法分析婴儿乳粉中的唾液酸

解鸿蕾, 李春, 刘宁

2013, 31 (8): 781-785. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2012.12051

摘要 ( 1335 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(833KB) ( 367 )

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定婴儿配方乳粉中唾液酸含量的分析方法。利用酸水解方法释放出婴儿配方乳中的唾液酸,经HLB反相色谱固相萃取柱净化,采用BEH HILIC色谱柱分离,以0.1%甲酸水溶液和100%乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.25 mL/min,进样体积5 μL,柱温30℃,电喷雾质谱检测,正离子多反应监测模式进行定性和定量分析。结果表明:唾液酸在0.05~5.0 mg/L范围内与唾液酸峰面积的线性关系良好(R²=0.9989);以0.1、0.5、2.5和5.0 mg/L 4个添加水平进行添加回收试验,唾液酸的平均回收率为84.3%~98.9%,相对标准偏差为4.9%~8.2%;唾液酸的检出限为0.01 mg/L。该方法简单、快速、重复性好、灵敏度高,可广泛用于奶粉、牛奶及母乳中唾液酸含量的分析测定。

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醋酸酐衍生-气相色谱-质谱联用测定葡萄酒中的糖醇

周洪斌, 熊治渝, 余杨, 万荣, 李平, 沈波

2013, 31 (8): 786-790. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01005

摘要 ( 1534 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(823KB) ( 391 )

建立了先采用醋酸酐衍生然后用气相色谱-质谱联用仪检测葡萄酒中糖醇的方法。在葡萄酒中加入吡啶涡旋混合均匀,以5000 r/min (4℃)离心10 min。取上清液过有机滤膜,加入吡啶、醋酸酐衍生。加无水硫酸钠吸水后,经DB-5MS毛细管气相色谱柱分离,在选择离子监测(SIM)模式下进行检测。各目标物在0.019~1.25 mg/L (乳糖醇在0.039~2.50 mg/L)范围内线性关系良好,相关系数(r²)均大于0.99。赤藓糖醇、木糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇和乳糖醇的定量限(信噪比(S/N)=10)分别为0.17、0.29、0.43、0.46、0.47和2.88 mg/L;检出限(S/N=3)分别为0.05、0.08、0.13、0.14、0.14和1.38 mg/L。在40 mg/L和80 mg/L加标水平下,6种糖醇在葡萄酒基质中的回收率为80.15%~108.75%,相对标准偏差(RSD)为2.16%~6.97%。该方法的灵敏度、准确度和精密度均符合相关的技术要求,适合于葡萄酒中糖醇含量的快速检测。

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气相色谱-质谱法检测涂料中的六溴环十二烷

王惠, 薛秋红, 陶琳, 叶曦雯, 梁生康, 李艳秋, 牛增元

2013, 31 (8): 791-794. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01014

摘要 ( 1707 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(812KB) ( 225 )

建立了防火涂料中阻燃剂六溴环十二烷(HBCD)的气相色谱-质谱(GC-MS)分析方法。样品用二氯甲烷进行萃取,萃取液经有机滤膜过滤后,用气相色谱-质谱联用仪进行测定。在选择离子检测模式下以m/z 157、239、319、401为定性离子,m/z 239为定量离子进行结构确证和定量检测。在优化的实验条件下,六溴环十二烷标准溶液在5~100 mg/L的质量浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.999。对市售的空白丙烯酸树脂涂料样品及环氧树脂涂料样品进行加标回收试验,结果表明本方法的平均回收率为92.9%~116.3%, RSD不超过8%。方法的检出限(S/N=3)为30 μg/g,定量限(S/N=10)为100 μg/g。本方法简便、快速、准确性好、精密度高,能够满足检测工作的实际要求。

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微流蒸发光散射检测器与毛细管液相色谱的联用及其在银杏叶提取物分析中的应用

赵卉, 王玉红, 刘芳, 王彦, 谷雪, 阎超

2013, 31 (8): 795-799. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2012.12043

摘要 ( 1793 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(1003KB) ( 211 )

将微流蒸发光散射检测器( μELSD)与毛细管液相色谱(cLC)联用,应用于中药银杏叶提取物及其分散片制剂的分离检测领域。首先对 μELSD仪器参数进行优化。通过调节漂移管温度与载气流量,提高了分析物的响应,并减小了噪声。然后,搭建了cLC-μELSD分离检测平台,其相对常规LC可大大减小实验试剂消耗。流动相A为0.05%(体积分数,下同)三氟乙酸(TFA)水溶液,流动相B为含0.05% TFA的甲醇溶液。最优的洗脱梯度条件为:0~10 min,5%B~25%B;10~25 min,25%B~38%B;25~35 min,38%B;35~40 min,38%B~42%B;40~55 min,42%B~50%B。银杏叶提取物和复杂中药制剂银杏叶提取物分散片都得到了较好的分离,并在其中鉴定到紫外波段几乎无吸收的重要内酯类活性成分白果内酯以及银杏内酯A、B和C。测定了不同厂家银杏叶提取物中萜类内酯洗脱时间的相对标准偏差,结果均不大于2.42%,表明该体系在目标物的分析上具有良好的重现性。实验证明所建立的cLC-ELSD体系在复杂中药体系的分离检测中有良好的应用性。

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高效液相色谱法分离和测定小麦中的5种内源激素

张玉琼, 仲延龙, 高翠云, 董召荣, 陈娜, 王梅方

2013, 31 (8): 800-803. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01011

摘要 ( 1669 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(819KB) ( 567 )

建立了高效液相色谱法(HPLC)用于分离和测定小麦中的吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA₃)、玉米素(ZT)和水杨酸(SA)5种植物内源激素。经过条件优化,选用甲醇作为样品提取溶剂。然后,经石油醚和乙酸乙酯萃取,经Sep-Pak C18小柱纯化。液相色谱的分离采用Eclipse XDB-C₁₈ (250 mm×4.6 mm, 5 μm)反相色谱柱;流速为1 mL/min;进样量10 μL。检测器波长设置为254 nm; 14.5 min时切换到240 nm; SA洗脱后即18 min时切换回254 nm。流动相A为甲醇,B为乙酸溶液(pH 3.6)。梯度条件为0~7 min, 20%A; 7~10 min, 20%A~28%A; 10~17 min, 28%A; 17~19 min, 28%A~40%A; 19~35 min, 40%A。结果表明,小麦中各激素的分离效果理想,加标回收率达96.9%~98%,相对标准偏差在1.54%~2.29%之间。因此,该方法的建立为快速、准确地分离和测定小麦内源激素提供了可靠的方法。

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高效液相色谱-蒸发光散射法测定食品中的单糖、双糖、低聚果糖和糖醇

丁洪流, 李灿, 金萍, 袁丽红, 姚永青, 陈英, 李培

2013, 31 (8): 804-808. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01013

摘要 ( 1987 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(832KB) ( 548 )

建立了食品中常用的木糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、赤藓糖醇、木糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇等13种单糖、双糖、低聚果糖和糖醇的高效液相色谱同时分离检测的方法。该法采用NH₂色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,蒸发光散射检测器检测;13种糖在0.1~5 g/L内均具有良好的线性关系,检出限均在0.1 g/L以下,精密度(RSD)为2.69%~7.21%,回收率为96.1%~105.2%,结果较为理想。将该法用于实际样品检测,结果显示食品标签明示和实际成分相差较大。

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固相萃取-微乳液相色谱法测定环境水体中的3种酚类化合物

丘秀珍, 郭会时, 陈步青

2013, 31 (8): 809-812. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01029

摘要 ( 1251 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(800KB) ( 192 )

建立了固相萃取-微乳液相色谱法同时测定环境水体中的苯酚、双酚A (BPA)、2,4-二氯苯酚3种酚类化合物的检测方法。水样加酸酸化后,经C18固相萃取小柱富集净化,用微乳液相色谱法测定3种目标物的含量。在Inertsil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)上以微乳(3.0%十二烷基硫酸钠(SDS)-6.0%正丁醇-0.8%正庚烷-90.2%(水+0.5%HAc))和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm。结果表明,苯酚、双酚A、2,4-二氯苯酚的检出限(S/N=3)依次为0.74、8.0、8.0 μg/L,线性范围在0.1~10 mg/L范围内,相关系数(r)均大于0.999。将3种酚类化合物定量加到空白水样中,苯酚、双酚A、2,4-二氯苯酚的加标回收率分别为82.7%、87.8%、82.6%,其RSD均小于5%(n=6)。对环境水样的酚类化合物分析也取得了良好的加标回收率,其值均在85.7%~113.2%之间。结果表明,该方法准确可靠、灵敏度高,适用于环境水体中酚类化合物的检测。

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一种凝血酶亲和色谱介质的制备方法

王雄飞, 张玉杰, 叶静, 罗志强, 詹雪艳, 袁瑞娟

2013, 31 (8): 813-816. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01024

摘要 ( 989 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(792KB) ( 202 )

对凝血酶-琼脂糖亲和色谱介质的制备方法进行了研究。首先使用凝血酶和溴化氰活化的琼脂糖制备凝血酶-琼脂糖亲和色谱介质,然后用生色底物法考察亲和色谱介质上凝血酶的活性,以凝血酶活性为指标对最佳偶联条件进行了优化。结果表明最佳条件为使用pH 8.3的Na₂CO₃-NaHCO₃溶液(含0.5 mol/L NaCl)为缓冲溶液,凝血酶用量为每1 g色谱介质加入凝血酶200 U,室温反应10 h。在最佳条件下所制备的色谱介质有较好的稳定性,在4℃条件下存放40天,亲和介质上的凝血酶活性仍有70.6%保留。该亲和色谱介质可广泛用于含凝血酶抑制剂的天然药物筛选和分离纯化。

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