色谱

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色谱最新研究亮点

张祥民

2010, 28 (6): 527-528. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00527

摘要 ( 1777 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(74KB) ( 770 )

1色谱保留机理与极限理论模型研究 2一种新型无机-有机杂合材料整体色谱柱 3蛋白质样品的色谱分离与富集方法研究 4一种后修饰蛋白质的气相色谱-质谱测定方法

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肽段反相色谱保留时间预测算法及其在蛋白质鉴定中的应用

刘超,王海鹏,付岩,袁作飞,迟浩,王乐珩,孙瑞祥*,贺思敏*

2010, 28 (6): 529-534. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00529

摘要 ( 3605 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(181KB) ( 437 )

液相色谱-质谱(LC-MS)联用是当今规模化蛋白质鉴定的主流技术。肽段在反相液相色谱(RPLC)中的保留时间主要是由肽段的理化性质和LC条件(固定相、流动相)决定的。可以通过分析肽段的理化性质,并量化它们对肽段色谱行为的影响来预测保留时间。预测结果可以用于帮助提高蛋白质鉴定的数量和可信度,也可用于肽段的翻译后修饰等研究。现在已有的保留时间预测算法主要有保留系数法和机器学习法两大类,得到的预测保留时间与实际保留时间相关系数可达到0.93。随着色谱和质谱技术的不断发展,肽段色谱行为的稳定性和重现性越来越好,保留时间预测结果也越来越准确。预测肽段保留时间将成为提高蛋白质鉴定结果的重要技术手段之一。

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高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的包涵体蛋白质

贾佳,王骊丽*,高栋,耿信笃

2010, 28 (6): 535-540. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00535

摘要 ( 2673 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(226KB) ( 642 )

Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E. coli)中表达得到的Flt3配体的包涵体进行回收、洗涤,溶解于8 mol/L脲后在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)柱上进行rhFL包涵体的复性与同时纯化,并对其保留特征和复性规律进行了研究。结果表明,在连续进样、变性蛋白质质量浓度为8.51 g/L、固定相选用端基为PEG800、流动相添加4 mol/L脲、1.8 mmol/L 还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3 mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSH)、pH 7.0的优化条件下,复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率为36.9%,纯度达94.5%以上。本文仅用一步HPHIC法成功地复性与同时纯化了rhFL蛋白质,为获得高活性的rhFL产品奠定了一定的工作基础。

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梯度液相色谱中任意等度、线性和阶梯梯度组合下的保留时间公式

郝卫强*,狄斌,杨永兵,陈强,王俊德

2010, 28 (6): 541-546. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00541

摘要 ( 2754 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(210KB) ( 711 )

基于线性溶剂强度模型,应用特征线分析的方法求解梯度洗脱模式下的理想液相色谱模型。在考虑到梯度延迟时间会对溶质的保留时间造成影响的情况下,得到适合于梯度液相色谱中任意等度、线性和阶梯梯度组合条件下的保留时间推导公式。应用这些公式计算任意的梯度条件下的保留时间,并将得到的结果与数值计f算的结果进行比较,二者完全一致,从而验证了推导得到的保留时间公式的正确性。由于这些公式具有形式简单、适用范围广等优点,因此可方便地应用于实际应用中,具有较高的实用价值。

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血浆游离脂肪酸代谢轮廓柱前衍生定量方法在糖尿病患者中医虚证分型中的应用

徐文娟,黄宇虹,王龙星,杨乾栩,肖红斌*,张德芹*

2010, 28 (6): 547-550. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00547

摘要 ( 2734 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(156KB) ( 556 )

以α-溴代苯乙酮为衍生化试剂,十七酸为内标物,建立了糖尿病患者血浆中游离脂肪酸(FFA)代谢谱分析法,实现了6种主要FFA及6种微量FFA的定量分析。用此方法分析了75位临床糖尿病患者的血浆FFA代谢谱,并通过线性判别分析(LDA)对气虚和气阴两虚两种中医虚证进行了关联分析,正判率为94.3%。逐步判别分析结果表明,花生四烯酸(C20:4)和油酸(C18:1)承载了这两种虚证的重要信息,可作为潜在的标志物。利用代谢组学技术研究血浆FFA代谢谱与中医虚证的相关关系对规范证候临床诊断,提高中医药诊疗体系的可信度与可重复性具有重要意义。

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原子转移自由基聚合技术用于以单分散树脂为基质的温敏色谱固定相的制备及性能评价

欧阳康龙,曹颖,王富强,龚波林*

2010, 28 (6): 551-555. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00551

摘要 ( 2667 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(200KB) ( 494 )

以α-溴异丁酰溴为引发剂,CuCl/CuCl2/2,2′-联二吡啶(Bpy)为催化体系,在室温条件下通过原子转移自由基聚合(ATRP)使N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)键合在单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂（PGMA/EDMA 树脂）表面,制备了具有温敏性的聚合物色谱填料,并用元素分析、红外光谱等对其进行了表征;详细考察了该填料对芳香烃化合物的分离性能、温敏性能、稳定性和重现性。元素分析得出NIPAM单体的接枝率为10.4%;通过改变温度,可以有效地分离对羟基苯甲醛、邻甲酚和4-丁基苯胺3种混合物。结果表明,所合成的固定相具有很好的色谱性能和温敏性能,稳定性和重现性良好。

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梯度淋洗离子对色谱法测定咪唑离子液体中的阳离子

高微,于泓*,马亚杰

2010, 28 (6): 556-560. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00556

摘要 ( 2733 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(176KB) ( 536 )

采用梯度淋洗离子对色谱-紫外检测(IPC-UV)法分离测定5种咪唑离子液体中的阳离子。实验采用ZORBAX Eclipse XDB C18色谱柱,以离子对试剂与乙腈为流动相,首先考察了离子对试剂种类和浓度、乙腈浓度和色谱柱温度对咪唑阳离子保留的影响,然后确定了最适宜分离的色谱条件。在此条件下可同时基线分离5种咪唑阳离子。所测阳离子的检出限(S/N=3)为0.05～0.30 mg/L,峰面积的相对标准偏差(RSD, n=5)在0.1%以下。将此方法用于分析实验室合成的2种1-烷基-3-甲基咪唑离子液体中的阳离子,加标回收率在98.6%～102.1%之间。本方法准确、可靠,具有较好的实用性。

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无胶筛分毛细管电泳法测定猕猴血浆中的反义寡核苷酸药物癌泰得

王秀中,王清清,王诗鸿,李卫平,宋海峰*,鲁丹丹,王升启

2010, 28 (6): 561-565. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00561

摘要 ( 2886 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(177KB) ( 499 )

采用两步固相萃取(SPE)法结合无胶筛分毛细管电泳(NGCE)技术建立了猕猴血浆中的反义寡核苷酸药物癌泰得的定量分析方法。优化并确定了SPE的相关条件(阴离子交换柱,上样缓冲液pH值为9.0,上样体积及洗脱体积分别为5 mL和3 mL)和NGCE的分析条件(灌胶时间为30 min,分离电压为24 kV)。在优化的条件下,猕猴血浆中癌泰得在1.95～250 mg/L范围内呈良好的线性关系,定量限(LOQ)为1.95 mg/L。批内准确度为93.38%～100.71%,批内相对标准偏差＜11%;批间准确度为89.46%～103.46%,批间相对标准偏差＜9%。在不同条件(室温下存放4 h; 4 ℃下存放24 h；反复冻融（-80 ℃至室温）2次；-80 ℃下保存1个月)下癌泰得在猕猴血浆中的稳定性良好。已将该方法成功地应用于癌泰得的猕猴药代动力学研究。

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不同石斛枫斗中酚酸类活性成分的比较及杓唇石斛素和石斛酚含量的测定

周婧,许志良,孔宏伟*,路鑫,许国旺

2010, 28 (6): 566-571. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00566

摘要 ( 2586 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(332KB) ( 811 )

建立了基于液相色谱-离子阱飞行时间串联质谱(LC-IT-TOF MS/MS)的酚酸类分析方法,对6种共18批次的石斛枫斗药材中的酚类化合物进行了研究,其中18种酚酸类化合物得到初步定性。在共有化合物中选择杓唇石斛素和石斛酚作为质量控制的目标化合物。在此基础上,采用响应面法(RSM)确定了提取溶剂为60%甲醇、提取时间为65 min的超声提取杓唇石斛素和石斛酚的最佳条件,建立了石斛枫斗中杓唇石斛素、石斛酚的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法。定量线性优于0.999 8,检出限(LOD)分别为0.18 mg/L和0.09 mg/L,重复性的相对标准偏差(RSD)小于3%,加标回收率均值分别为97.1%和101.4%。这些结果表明本研究建立的方法可用于石斛枫斗药材中酚酸类化学成分研究及质量控制。

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高效液相色谱-离子阱质谱法测定尿液中β2-受体激动剂及β-受体阻断剂

苗虹,邹建宏,范赛,甘乐文,赵云峰,吴永宁,*

2010, 28 (6): 572-578. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00572

摘要 ( 2706 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(277KB) ( 522 )

建立了尿液中23种β2-受体激动剂及5种β-受体阻断剂的高效液相色谱-离子阱质谱(HPLC-IT-MS)测定方法。尿液样品采用冷冻高速离心沉淀蛋白,上清液过ExtrelutTM硅藻土柱,用乙酸乙酯洗脱后,洗脱液经旋转蒸发仪浓缩并复溶待测。HPLC分离采用AtlantisT3-150 mm色谱柱,以甲醇和含0.1%甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱,IT-MS采用电喷雾离子源在多反应离子监测模式下测定。定量分析选择9种经过氘代同位素标记的β2-受体激动剂为内标。各化合物的线性范围为0.005～0.16 mg/L,尿液中的检出限均能达到0.2 μg/L。空白尿液样品中不同加标水平的回收率为57.1%～127.1%,相对标准偏差为1.1%～31.1%。该方法简便快速,灵敏度高,适用于人或动物尿液中23种β2-受体激动剂及5种β-受体阻断剂的定性和定量分析。

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液相色谱-电喷雾串联质谱法测定生姜中的215种农药残留

曹静,庞国芳*,王明林*,范春林

2010, 28 (6): 579-589. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00579

摘要 ( 2615 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(364KB) ( 1070 )

建立了生姜中215种农药多残留测定的液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)方法。样品用1%醋酸-乙腈溶液均质提取,经Sep-Pak Vac固相萃取柱净化,乙腈-甲苯(3:1, v/v)洗脱,旋转蒸发浓缩至约0.5 mL后,于室温氮气吹干,用乙腈-水(3:2, v/v)溶解,以电喷雾电离串联质谱在正离子多反应监测(MRM)模式下进行测定。在定量限水平进行添加回收率实验,方法的回收率范围为68.1%～132.6%,其中回收率在70%～120%的占94.4%,相对标准偏差(RSD)范围为0.4%～25.0%。方法的检出限(S/N=3)和定量限(S/N=10)范围分别为0.01～70.45 μg/L和0.04～234.84 μg/L。该方法操作简便,灵敏度、准确度和精密度均符合农药多残留检测技术要求,适用于生姜中215种农药多残留的快速测定。

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高效液相色谱-串联质谱法同时测定辣椒粉及辣椒油中的7种罗丹明染料

胡侠,肖光*,潘炜*,毛希琴,李鹏

2010, 28 (6): 590-595. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00590

摘要 ( 2399 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(212KB) ( 610 )

建立了辣椒粉及辣椒油中7种罗丹明染料的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定方法。样品经正己烷或甲醇-水(体积比为1:1)溶液提取后,经固相萃取(SPE)柱净化,采用SB-C18柱分离,以乙腈和水(含体积分数为0.1%的甲酸)为流动相进行梯度洗脱,采用正离子模式质谱检测,在多反应监测(MRM)模式下进行定性定量测定。7种罗丹明类染料在0.0005～1.0 mg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r2)均大于0.997;方法的检出限分别为0.21～51 μg/kg(辣椒粉)和0.19～25 μg/kg(辣椒油);方法的回收率为85.0%～106.0%,日内及日间相对标准偏差均小于20%。该方法简单、灵敏度高、分析时间短,适用于辣椒粉和辣椒油中7种罗丹明染料的同时测定。

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液相色谱-串联质谱法快速测定蜂蜜中3种硝基咪唑类药物残留

刘永明*,曹彦忠,李金,吴艳萍,张进杰,李学民,葛娜

2010, 28 (6): 596-600. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00596

摘要 ( 3037 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(176KB) ( 550 )

建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)快速测定蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑和二甲硝咪唑3种硝基咪唑类药物残留的分析方法。蜂蜜样品用水溶解后,直接上样至Oasis HLB固相萃取柱净化,依次用水和甲醇-水溶液(1:9, v/v)淋洗,用乙酸乙酯洗脱。洗脱液经浓缩、溶解、过滤后进行LC-MS/MS检测,外标法定量。在添加水平为0.05～2.0 μg/kg时,平均添加回收率为76.6%～89.7%,相对标准偏差(n=8)为5.2%～9.9%。甲硝唑的检出限为0.1 μg/kg,洛硝哒唑、二甲硝咪唑的检出限均为0.2 μg/kg。应用所建立的方法对出口蜂蜜样品进行了测定,结果表明该方法操作简单、快速,结果准确、可靠,灵敏度和准确度满足现在日本和欧盟对蜂蜜中3种硝基咪唑类药物残留量的检测要求。

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固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法检测粮食及其制品中的玉米赤霉烯酮类真菌毒素

孟娟,张晶,张楠,施嘉琛,邵兵*

2010, 28 (6): 601-607. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00601

摘要 ( 3355 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(257KB) ( 925 )

建立了粮食及其制品中6种玉米赤霉烯酮类物质(α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。样品用84%(体积分数)乙腈水溶液提取,通过ENVI-Carb石墨化炭黑(GCB)固相萃取柱进行富集净化,用6 mL二氯甲烷-甲醇(7:3, v/v)溶液洗脱,采用UPLC-MS/MS进行测定。在ACQUITY UPLCTM BEH C18反相柱上分离,梯度洗脱,流动相为水和乙腈;质谱采集模式为电喷雾负离子多反应监测模式。以α-玉米赤霉烯酮-d4为内标,6种目标物的线性范围为0.1～50 μg/L,相关系数(R2)大于0.99,检出限为0.1～0.2 μg/kg, 3个不同水平的加标平均回收率为79.9%～104.0%,相对标准偏差不大于10%。应用该方法对北京市的粮食及相关产品进行了分析,结果发现玉米赤霉烯酮的检出率最高,含量为0.42～220.7 μg/kg;此外还检出了α-和β-玉米赤霉烯醇。该方法具有操作简单、灵敏度高、重现性好等特点,符合食品样品中痕量污染物的检测要求。

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液相色谱-毛细管气相色谱/质谱离线联用分析烟草中的挥发性及半挥发性成分

白军超,刘绍锋,谢复炜,刘惠民*,夏巧玲

2010, 28 (6): 608-614. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00608

摘要 ( 3026 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(275KB) ( 592 )

建立了一种用于烟草样品中挥发性、半挥发性成分分析的液相色谱-毛细管气相色谱/质谱(LC-CGC/MS)离线联用方法。研究了LC-CGC/MS的分离机理。LC分析选用氨基分析柱(250 mm×2.0 mm, 5 μm)作为分析柱,正己烷-二氯甲烷-乙腈(90:6.6:3.4, v/v/v)作为流动相,对挥发性、半挥发性成分进行分离,收集得到5个馏分,并存放在5个氮吹瓶中。多次进样并收集相同时间段的馏分,氮吹浓缩至1 mL,然后分别进行CGC/MS分析,所用的CGC柱为DB-5MS(60 m×0.25 mm×0.25 μm)。结果显示,与直接采用CGC/MS分析相比,采用LC-CGC/MS分析复杂样本的效果更好,定性的可靠性更高。

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液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱同时分析烟草中的20种游离氨基酸

黄翼飞*,胡静

2010, 28 (6): 615-622. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00615

摘要 ( 2748 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(280KB) ( 785 )

建立了液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(LC-ESI-IT-MS/MS)同时分析烟草中20种游离氨基酸的方法。烟草样品经萃取后过滤直接进样,无需进行衍生和固相萃取等其他前处理步骤。液相色谱采用HyPURITY C18反相色谱柱(200 mm×2.1 mm, 5 μm),采用1%(体积分数,下同)乙腈水溶液(含0.1%九氟戊酸)和90%乙腈水溶液(含0.1%九氟戊酸)为流动相进行梯度洗脱。结果表明,20种氨基酸的检出限(LOD)为0.01～0.05 μmol/L (S/N=3),线性相关系数均大于0.9977,峰面积测定的相对标准偏差(RSD)为0.78%～4.93%。该方法分析效率、灵敏度和选择性高,已成功应用于多种烟草样品中氨基酸的分析测定。

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中心切割式多维气相色谱/质谱系统中中点限流器的改进及其在卷烟烟气中苯并［a］芘检测中的应用

史佳沁*,刘百战,谢雯燕

2010, 28 (6): 623-627. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00623

摘要 ( 2309 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(216KB) ( 594 )

对多维气相色谱的核心部件中点限流器进行了改进,用一段0.25 mm i.d.毛细管柱取代石墨限流管,Y形玻璃压合连接器取代两孔石墨垫,显著提高了一维色谱保留时间的稳定性,保证了中心切割范围的准确性,且消除了石墨对苯并［a］芘的吸附残留。同时,将本系统应用于卷烟烟气中苯并［a］芘的检测。采用剑桥滤片捕集烟气粒相物,环己烷萃取,以氘代苯并［a］芘为内标,直接用中心切割式多维气相色谱/质谱(MDGC/MS)法测定。该法线性关系良好,其线性范围为1.47~29.4 μg/L (r2=0.9999)；重复性好,测得实际样品中苯并［a］芘含量的相对标准偏差（RSD)为1.94%；回收率为90.74%~101.86%；检出限和定量限分别为0.31 ng/支及1.03 ng/支,可以满足检测要求。应用本系统对2R4F参比卷烟烟气中苯并［a］芘进行了检测,结果与文献报道值基本一致。

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阴离子交换离子色谱法测定乳酸催化制备的丙烯酸

石海宁,王辉,陶丽芝,王宗花,丁明玉*

2010, 28 (6): 628-631. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00628

摘要 ( 3199 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(125KB) ( 593 )

通过乳酸催化脱水制备丙烯酸具有良好的应用前景。为了对其中的催化过程进行有效、及时的监控,建立了一种同时测定乳酸及丙烯酸的阴离子交换色谱法(AEC)。选择Metrohm A Supp 5阴离子交换柱(150 mm×4.0 mm),以2 mmol/L Na2CO3+2 mmol/L NaHCO3混合水溶液为流动相,采用化学抑制电导检测技术,乳酸和丙烯酸在6 min内即可实现完全分离。乳酸和丙烯酸工作曲线的线性范围分别为0.1～500 mg/L和0.1～200 mg/L,检出限分别为0.030 mg/L和0.035 mg/L,加标回收率分别为100.7%～106%和99.6%～103%,相对标准偏差分别为2.16%~2.49%和2.42%~2.48%。该方法准确、快速、灵敏、重现性好。

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超高效液相色谱-串联质谱法测定浓缩苹果汁中的熊果苷

孔祥虹,*,何强,乐爱山,吴双民,李建华

2010, 28 (6): 632-634. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2010.00632

摘要 ( 2621 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(123KB) ( 565 )

建立浓缩苹果汁样品中熊果苷的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱(SPE-UPLC-MS/MS)检测方法。浓缩苹果汁样品用水溶解、过滤后,用聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物(PS-DVB)固相萃取柱净化,外标法定量。测定时用Eclipse Plus C18色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8 μm)分离,甲醇-水系统梯度洗脱;MS测定采用多反应监测(MRM)模式。熊果苷的检出限为0.02 mg/L,在0.04～2.0 mg/L的范围内标准溶液的峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,回收率为75.2%～102.7%,相对标准偏差(RSD)低于8.9%。该方法简便、快速、灵敏,可用于浓缩苹果汁样品中熊果苷的检测和确证。

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